邻苯三酚的吸光度值变化率怎么求
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- 2023-03-14 07:56:48
多酚氧化酶邻苯三酚比色法(追加)
实验二十六 植物体内多酚氧化酶活性的测定 一、目的 通过实验,掌握植物体内多酚氧化酶活性的测定方法。 二、原理 多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶,在有氧的条件下,能使一元酚和二元酚氧化产生醌。用分光光度法在525nm波长下测其吸光度,即可计算出多酚氧化酶的活力和比活性。反应式如下: 多酚氧化酶 邻苯二酚(儿茶酚)+1∕2 O2 ——————→ 邻醌 + H2O 三、材料、仪器及试剂 1. 材料:马铃薯块茎等 2. 仪器:UV-1206或UV-1240分光光度计;离心机;恒温水浴;研钵或匀浆机;试管;移液管;纱布袋等。 3. 试剂:聚乙烯吡咯烷酮(PVP);0.01mol•L-1 pH 6.5磷酸缓过氧化氢酶活性测定公式计算方法
这样应该可以了吧 一、实验目的: (1)掌握SOD酶的提取、分离、检测一般步骤。 (2)了解酶在提取过程中的两个参数:回收率、纯化倍数。 (3)掌握离心机的使用。 二、实验原理: 邻苯三酚在碱性条件下,能迅速自氧化,释放出O2-,生成带色的中间产物,中间物的积累在滞留30~45s后,与时间成线性关系,一般线性时间维持在4min的范围内,中间物在420nm波长处有强烈光吸收。当有SOD存在时,由于它能催化O2-与H+结合生成O2和H2O2,从而阻止了中间产物的积累,因此,通过测定光吸收即可求出SOD的酶活性。 三、实验试剂: 大蒜、冷丙酮、磷酸缓冲液(PH7.8,0.05mol/L)、氯仿-乙醇邻苯三酚自氧化,有颜色的中间产物是什么,为什么SOD会抑制中间产物形成?
邻苯三酚在碱性条件下,能迅速自氧化,释放出O2-,生成带色的中间产物,反应开始后反应液先变成黄棕色,几分钟后转绿,几小时后又转变成黄色,这是因为生成的中间物不断氧化的结果。 实验中测定的是邻苯三酚自氧化过程中的初始阶段,中间物的积累在滞留30-45s后,与时间成线性关系,一般线性时间维持在4min的范围内,中间物在420nm波长出有强烈光吸收。当有SOD存在时,由于它能催化O2-与H+结合生成O2和H2O2,从而阻止了中间产物的积累,因此,通过计算即可求出SOD的酶活性。 以上是文献里的 我的理解是O2可以催化中间产物变色,而O2-被SOD作用后产生O2正好可以使中间产物变色,因为它说测定的是用邻苯三酚自氧化法时,如果自氧化速率超过0.06-0.08OD/min的话,有什么影响;谢谢
[原理] SOD的活力测定方法很多,常见的有化学法、免疫法和等电点聚焦法。其中化学法应用最普遍,化学法的原理主要是利用有些化合物在自氧化过程中会产生有色中间物和O2 -,利用SOD分解而间接推算酶活力。在化学方法中,最常用的有黄嘌呤氧化酶法,邻苯三酚法,化学发光法,肾上腺素法,NBT-还原法,光化学扩增法,Cyte还原法等。其中改良的邻苯三酚自氧化法简单易行较为实用。化学发光法和光化学扩增法不适用于测定Mn-SOD,但对于Cu/Zn-SOD反应极灵敏。Cyte还原法用于Mn-SOD活力测定结果稳定,重复性好。但专一性和灵敏度不够理想,而且需要特殊仪器,实际应用受到限制。亚硝酸盐形成法与CN—抑为什么用邻苯三酚法做体外抗氧化测出空白吸光度比样液小
可能时间,温度不同。邻苯三酚自氧化法的影响因素较多,如时间,温度,邻苯三酚的浓度,缓冲液PH等,讨论以上相关因素对自氧化速率的影响,同时,也探讨了不同水质对自氧化速率的影响,从而进一步阐明了掌握好实验条件的重要性。
抗氧化(Anti-Oxidant)即抗氧化自由基的简称,包括一系列可有效抑制人体产生的自由基的物质,即便低浓度都可有效抑制人体内的自由基的氧化反应,起到抗衰老、延缓疲劳、加快体能恢复的作用,一定程度上还能够避免癌症或其他疾病的产生。自由基也叫游离基,即人体在生活中与外界持续接触(如呼吸、污染、辐射等)而不可避免地产生的一种具有强氧化性的原子或基团,与癌症、衰老以及其他许多疾病的产生都存在一定关联,自由基越是过量,人体越不健康,衰老的也越快。人体在产生自由基时,也会同时产生抵抗和抑制自由基的抗氧化物质。抗氧化物质可由人体天然产生,也可通过食物进行补充。天然的抗氧化物质如维生素C、维生素E、天然虾青色素等,可从众多蔬菜、水果、藻类以及蜂蜜、红酒、鲑鱼等食物中摄取。
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