切割目的基因和质粒的酶是否一定相同

切割质粒和含目的基因的外源DNA必须用同一种限制酶,这句话对吗?

不对,因为太绝对!一般情况下是用同一种限制性内切酶,这样暴露同样的黏性末端,然后用DNA连接酶进行连接.但是也存在不同的限制性内切酶切割形成相同的黏性末端.

“基因工程中切割目的基因和质粒的限制酶可以不同.”为什么？

识别序列有区别--G↓GATCC--限制酶1,2都可以切，但是--↓GATC--只能有酶2切。懂了么，就是说酶一要识别出6个碱基这样的排序才能切，但是酶二只需要识别出4个这样的排序，酶二的选择性比较低。然后，请给我题目里的那张图~是否在标记基因中存在GATC的序列呢，如果有，酶二会去把他切断，所以就会破坏标记基因了。 求采纳为满意回答。

当使用限制酶来获取目的基因时是否一定要用同种限制酶切割DNA和质粒来获取目的基因

一般情况下是的，因为只有这样才能有相同的黏性末端，目的基因和运载体才能重组。但也有两种不同的内切酶产生相同的黏性末端如G↓ATTCG 和↓ATTC。 还有一种可能是，因为运载体上的基因表达是由方向的（即启动子和终止子的位置），而目的基因的两端末端相同，那么就有可能使目的基因反向接在运载体上，这就可以用双酶切解决，即目的基因和运载体都用相同的两种内切酶，这就可以使目的基因与运载体定向连接了，如： －－↓－－－－－－↓－－（运载体）￣￣↓￣￣￣￣￣￣↓￣￣（目的基因） 酶1 酶2 酶1 酶2 很抱歉，我只能画出这样的图列，希望能看明白。

为什么要两种酶才能切割基因（两端要不同的限制酶），不能是同一种吗？

切割目的基因时同种序列当然可以用同种限制酶切割；但有时也用不同种的限制性酶割。

用不同限制酶切割的目的是：保证目的基因和质粒（运载体）的准确连接，避免无效连接过多。可以用不同限制酶切割相同序列的原理：

虽然一种限制酶只能识别一种特定的氨基酸序列，但两种限制酶识别的序列可以相包含，例：酶A识别GGATCC序列，酶B识别GATC序列，则GGATCC序列就可以被两种限制酶切割。

同步双酶切

同步双酶切选择能让两种酶同时作用的最佳缓冲液是非常重要的一步。NEB每一种酶都随酶提供相应的最佳NEBuffer，以保证100%的酶活性。NEBuffer的组成及内切酶在不同缓冲液中的活性见《内切酶在不同缓冲液里的活性表》及每支酶的说明书。

能在最大程度上保证两种酶活性的缓冲液即可用于双酶切。由于内切酶在非最佳缓冲液条件下的切割速率会减缓，因此使用时可根据每种酶在非最优缓冲液中的具体活性相应调整酶量和反应时间。

以上内容参考：百度百科-酶切技术

构建基因表达载体的过程中，切割质粒和 目的基因时 是否需要同一种限制酶？

对于这个问题，采取以下回答：1.教材中确实采用单酶切的方法（因为我们的基因工程处于飞速发展的阶段，以前多采用此方法），如果应对考试，题目没有特别说明即认为用同一种限制性核酸内切酶；2.但是单酶切容易出现反向连接和自身环化的问题（可以自己在草稿纸上举例试一试），所以现在的技术多采用双酶切，即目的基因两端的粘性末端不同，从而防止反向连接和自身环化，有效提高形成重组DNA的效率。