pcr技术检验有微生物的样品却没有检出,为什么
- 教育综合
- 2023-11-03 07:57:16
用pcr方法检测解脲脲原体核酸结果阳性,而微生物常规培养结果为阴性,可能的原因是什么?
PCR方法无法区分活菌死菌,只要有都可以检测到核酸。但微生物培养只能是活菌才可以。所以可能的原因是治疗有效,但死菌体还未排出体外。单克隆验证,菌液PCR有目的条带的位置,但是质粒PCR后,却没有批出我的目的条带这是为什么呀 谢谢
如果PCR系统没有问题,很可能是质粒和染色体发生了重组。建议提细菌的genome DNA 做一次PCR。如果是阳性,就说明是这样。 另外,还可以另挑几个菌落,重新提质粒扩增。PCR技术在食品微生物检测中的应用
PCR 技术检测微生物的基本原理是在被检测微生物核酸序列, 在PCR 体系下经高温变性、低温退火、适温延伸三步循环将单个核酸分子序列以2的指数进行大量复制扩增的过程。即在检测时, 被检测微生物双链DNA 序列在94℃变性解链成双链, 55℃特异性引物与单链DNA 结合, 72℃在引物的引导延伸复制检测微生物DNA 序列。以上三步进行循环扩增得到大量的被检测微生物DNA 序列, 最后一般在凝胶电泳下检测目的DNA。理论上只要样品中有一个分子的微生物就可以在短时间内用PCR 技术检测到。食品中污染微生物种类很多, 即使是同一种食品中微生物种类也有很多, 用传统的方法检测食品中微生物要分离出所有的微做支原体PCR检查出有解脲支原体2.38乘10的5次方。但两天后做微生物培养却未检测出有解脲和人型支原体
解脲支原体培养法很简单,试剂加入培养24小时即可。 PCR比较复杂点,精确性应该更高吧。 正常人也有10%的人解脲支原体阳性,服用阿奇霉素效果较好。
请学生物的同学帮忙介绍一下“PCR”
PCR 一、PCR概述 1、什么是PCR 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,简称PCR)又称无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术。 由美国科学家PE(Perkin Elmer珀金-埃尔默)公司遗传部的Dr. Mullis发明,由于PCR技术在理论和应用上的跨时代意义,因此Mullis获得了1993年化学诺贝尔奖。 2、PCR技术发展史 PCR原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基展开全文阅读