为什么在以尿素为唯一氮源的土壤微生物分离培养实验中，所有玻璃器皿需要用适当浓度浓硫酸浸泡24H？

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验——高中生物选修1

对比教材《生物技术实践》：

1. 当检验是否有杂菌污染时，应将接种后的培养基与一个未接种的培养基（所含物质相同）都放入适宜温度的恒温箱中，培养一段时间后，分别观察并记录结果。如果未接种的培养基出现了菌落则存在杂菌污染；反之，则不存在。（参见课本P20上方）

2. 在对培养基的选择作用进行检验时（这里就选择培养可分解尿素的细菌为例），应在以尿素为唯一氮源的培养基中培养经过选择培养基选择的菌种，并加入酚红指示剂，如果指示剂变红，则说明PH升高，尿素在脲酶的作用下分解产生NH3，即选择培养基能起到选择作用；反之，则不能。（参见课本P26图2-10与课题延伸第三段）

所以检验杂菌污染与检验选择培养基的选择作用时使用的培养基是不一样的

分离能分解尿素的细菌培养基的特点

分离能分解尿素的细菌培养基的特点：在以尿素为唯一氮源的培养基上，只有能分解尿素的细菌才能以尿素为氮源生长繁殖，不能分解尿素的细菌因缺乏氮源而无法生长繁殖。

分解尿素的细菌是异养微生物，因此培养基中应该加入有机碳源，如葡萄糖；分离分解尿素的菌的培养基从功能上分属于选择培养基，应该以尿素为唯一氮源；从物理性质上分属于固体培养基，因此应加入凝固剂琼脂糖。

培养条件

培养时应根据细菌种类和目的等选择培养方法、培养基，制定培养条件（温度、pH值、时间，对氧的需求与否等）。一般操作步骤为先将标本接种于固体培养基上，做分离培养。再进一步对所得单个菌落进行形态、生化及血清学反应鉴定。培养基常用牛肉汤、蛋白胨、氯化钠、葡萄糖、血液等和某些细菌所需的特殊物质配制成液体、半固体、固体等。

高中生物实验现象。以尿素为唯一氮源的培养基和完全培养基，二者共同培养后现象有什么不同？

以尿素为唯一氮源的培养基就是选择培养基，大部分细菌在这种培养基上不能生存，只有少部分以尿素为营养物的细菌才可以生存。而完全培养基中，大部分细菌都可以生存。所以二者共同培养后会出现，前者培养基中的菌少且都可以分解尿素，后者菌多种类各异。这样的对照实验可以说明选择培养基可以有选择性的培养我们想要研究的细菌，达到筛选细菌的目的。

分离土壤中分解尿素的细菌应注意哪些无菌操作？

1. 寻找目的菌株时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 2. 实验室微生物的筛选原理是人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。 3. 分离土壤中能分解尿素的细菌应配制尿素作为唯一氮源的培养基，因此，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。 4. 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。 5. 显微镜直接计数法是利用血球计数板在显微镜下直接计数，计数板上的计数室边长1mm，深度0.1mm，体积0.1mm3，通过测定一个计数室内的微生物数量，换算得到1ml菌液中的微生物数量

这些微生物以尿素为唯一氮源的微生物的原因

（1）根据酶的专一性可以判断，反刍动物瘤胃内栖息着许多以尿素为唯一氮源的微生物，这些微生物能分解尿素是因为它们能合成脲酶．从瘤胃中分离这些微生物必须先制备以尿素为唯一碳源的培养基，采用高压蒸汽灭菌，采用稀释涂布平板法接种，在适宜条件下培养一段时间后观察其中一个平板的菌落分布如图所示，推测该同学接种时可能的操作失误是涂布不均匀，如果发现每个平板中菌落形态多样，其原因可能是尿素分解菌的种类较多，或者操作过程污染了杂菌． （2）果胶酶是分解果胶的一类酶的总称，包括多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶、果胶酯酶等；在探究果胶酶的用量实验中，因变量是果汁的体积（或果汁的澄清度）． （3）植物组织培养中，用体积分