如何做一个成功的生物测定

生物测定试验设计的基本原则有哪些？

研究农药与生物的相关性，对农药及生物的要求是比较严格的。例如，室内的筛选或毒力测定，药品应该是纯品，至少要有确切的有效成分含量。而供试生物应该是纯种，个体差异小，生理标准较为均一的。同时，还必须以确定的环境条件为前提。故试验设计应该掌握以下原则：1．相对的控制环境条件

室内应该尽量保持与田间环境条件的一致性。因为环境条件的差异，尤其是本身环境条件的恶劣就极有可能会使供试生物体死亡。测定农药的毒力，原则上要求只有两个变数，一个是药剂的剂量或浓度作为自变数，另一个是死亡率或抑制率作应变数。药剂与生物的反应，一般是正相关，这样所得的结果，容易重复和分析。但环境条件，主要是温、湿度对农药及生物都有直接或间接的影响，因此，生物测定的试验条件，首先要求相对的控制环境条件，使影响因素力求稳定。室内尚可采用特定的恒温、恒湿设备来控制，同时，使用精密的测试仪器及严格的测试方法，而且供试虫种或菌种也用室内饲养标准化的纯种，这样尽可能消除或减少处理之间因条件或人为因素造成的差异，以提高试验的精确度。田间试验，除温、湿度外，光照、风雨等多因子变异因素使许多条件不能控制，但小区试验，也应尽量力求所选地区土壤肥力、病虫害分布、作物长势及管理水平等条件均匀相似，以减少试验误差为准则。

2．必须设立对照

在生物测定试验中，对照是十分重要的。因昆虫在试验期间往往有自然死亡的情况，故应设立对照加以校正。对照有3种：①空白对照：是不做任何处理的对照。②不含药剂对照：与药剂处理所用溶剂或乳化剂完全一样，只是不含药剂。③标准药剂对照：用标准药剂作对照。标准药剂是选择同类化合物已对某种病虫害确定是有效的药剂，它不仅可以与新品种对比，也可以消除一些偶然因素影响的误差。这3种对照，并不一定在每次试验中都设立，应根据具体情况和测定要求加以确定。

3．处理必须设重复

毒力的测试对象是群体，一个生物体个体之间对药剂的耐药性是有差异的，取样应具有代表性，每个处理要求一定的数量，重复的次数越多，结果越可靠。增加重复是减少误差的一种方法，但也不能过多，应根据不同的供试材料，各自的试验目的和要求而定。一般至少重复3次。

4．运用生物统计分析试验结果

统计方法是生物测定的基本技术，是判断和评价试验结果的工具之一。它是应用数学逻辑来解释生物界各种数量的资料，将其化繁为简，找出规律。统计学的处理，是分析结果中极重要的一环，可以从错综复杂的试验数据中，揭示农药与病虫害之间的内在联系，因此应该正确运用，以避免轻率下结论。

活体生物测定方法有哪些？

1．用家蝇检测蔬菜中的残留农药

20世纪60年代后期，我国台湾农业试验所采用生物测定方法进行农药残留检验，其原理是释放高敏感性的家蝇于菜汁中，4～5h后家蝇死亡率在10%以下即为合格，该方法过程简单，无须复杂仪器检测，缺点是检测时间较长，只对部分杀虫剂有反应，无法分辨残留农药的种类，准确性较低。

2．用大型水蚤为试验材料监测蔬菜中农药的残留

该方法的原理是将蔬菜汁按ISO标准稀释，每个剂量10个水蚤，测定24h、48h、96h的实验结果，以实验水蚤的心脏停止跳动作为最终死亡指标，测定半数致死浓度。袁振华等对该类测定方法作了探索性的研究，研究表明，大型水蚤测试技术完全适用蔬菜中的农药残留测定，并认为该方法具有快速、灵敏、简便、经济等特点，但该方法同样无法分辨残留农药的种类。

3．用发光细菌检测农药残留

发光细菌是一类非致病性的普通细菌，在正常的生理条件下能发出波长为490nm的蓝绿色的可见光。这种发光现象是细菌新陈代谢的结果，是呼吸链上的一个侧支。当发光细菌接触干扰和损害新陈代谢的物质，特别是有毒、有害物质时，就能使细菌发光强度下降或熄灭，而且毒物的浓度和细菌的发光强度呈负相关线性关系变化。利用这一特点就可以对农药残留试样进行测定。袁东星等利用发光菌进行农药残留检测，最小检出浓度为3mg/L。该方法已能用于检测甲胺磷、敌敌畏等常用有机磷农药。

发光细菌能同时对多种毒物产生发光受抑反应，但农药浓度与发光强度的线性关系不够准确，发光菌被激活后，它的发光强度会随时间的变化而改变。它具有快速、简便、灵敏、价廉的特点，在定性、半定量的现场快速检测中逐渐显现出了其优势。随着食品工业的发展，采用发光细菌法检测食品安全性作为一种快速的初筛方法，已逐渐受到人们的广泛关注。

细胞水平及分子水平的生物测定是怎样的？

传统的生物测定方法虽然所得数据较为可靠，但是往往所需要的时间较多，且供试药剂的需求量较大，现在新农药的筛选，供试化合物动辄几万个甚至更多，传统的方法根本无法满足数量巨大的筛选要求。基于以上原因，近年来，许多新的生物测定方法层出不穷。

（1）预期作用靶标抑制活性的测定。随着农药作用于昆虫的靶标部位、昆虫体内农药的代谢解毒机制渐渐为人们认知，通过检测供试药物对靶标或代谢物质的作用，可以简化生物筛选测定的步骤与时间，这也是生物合理设计农药的重要思路。

（2）MTT法。MTT（methylthiazoletrazolium）是一种黄色水溶性四噻唑蓝，活细胞中的琥珀酸脱氢酶可使MTT分解产生紫色结晶状颗粒积于细胞内和细胞周围。其量与细胞数呈正比，也与细胞活力呈正比，但是死细胞不具有这个能力。因此，用一定浓度的药剂处理指数生长期的细胞后一段时间，加入MTT，再测出所有混合液体的吸光值，可推出细胞的活力，衡量供试药剂的毒力大小。

一般步骤是首先培养昆虫细胞系，如棉铃虫细胞系、烟草夜蛾细胞系，取对数生长期细胞，置96孔微量滴定板中培养一定时间（使细胞贴壁），然后加入待测化合物，并继续培养24h，结束培养前一定时间，向孔内加入MTT母液，培养结束后弃去上清液，再向孔内加入一定溶剂，待生成物完全溶解后，置酶联检测仪上于570nm处读取吸光度值，通过细胞死亡率高低初步判断化合物有无活性，还可设置系列样品浓度，最终求出LD50/LC50值，以判断活性大小。

MTT法需要专门的无菌操作台及相配套的细胞培养设备，成本较高。但是，此法对药剂所需要的剂量少，能很好的满足现在高通量筛选等筛选技术的要求。

（3）生物传感器。生物传感器是一种以生物的部分活性物质作为敏感部件，结合物理化学分析仪器，对特定种类化学物质或生物活性物质具有选择性和可反应的分析装置。其中关键技术原理是传感器的生物敏感层与复杂样品中特定的目标分析物之间（如酶与底物、抗体与抗原、外源凝集素与糖、核酸与互补片段之间）的识别反应会产生一些物理化学信号（如光热、声音、颜色、电化学）的变化，这些变化通过不同原理的转换器（如光敏管压电装置、光极光敏电阻、离子选择性电极等）转换成第二信号（通常为电信号），经放大后显示或记录。

生物传感器按照识别元件可分为三类：基于分子（酶、抗原或抗体、受体、核酸、脂质体等）的传感器、基于细胞的传感器和基于组织切片的传感器。就敏感元件而言，前者是固定化的生物体成分，后两者是生物体本身。基于分子的生物传感器具有高度选择性和敏感性，只对一靶分子有响应。正因为这种高度选择性，可能会使某些具有相同功能的相关分子检测不到。而将活细胞作为探测单元，可以检测到许多未知的物质。目前生物传感器主要用于环境监测（生化武器、地下水污染等）、药物筛选、新药开发和基础神经学等研究，在农药领域的应用正在起步。

例如测定昆虫电生理反应。其原理是昆虫产生拒食行为与药剂刺激昆虫的味觉感受器如中栓锥感受器有一定的相关性，用供试药液刺激昆虫的中栓锥感受器，同时，将电极连接该感受器，通过电子设备接受并放大感受器发出的脉冲信号，用示波器或记录器记录这些信号，或直接输入电脑通过特定的处理软件对信号进行分析，判断活性的有无或大小。华南农业大学曾就炔类化合物和川楝素对亚洲玉米螟拒食活性与电生理反应做了相关的研究工作。

（4）生物芯片。生物芯片（biochip）技术，采用光导原位合成或微量点样等方法，将大量生物大分子，如核酸片段、多肽分子甚至组织切片、细胞等生物样品有序地固化于支持物（如玻片、硅片、聚丙烯酰胺凝胶、尼龙膜等载体）的表面，组成密集二维分子排列，然后与已标记的待测生物样品中靶分子杂交，通过特定的仪器，如激光共聚焦扫描或电荷耦联摄影像机（CCD）对杂交信号的强度进行快速、并行、高效地检测分析，从而判断样品中靶分子数量。

目前，生物芯片包括基因芯片、蛋白质芯片、组织芯片等。在已知的防治昆虫靶标中，可以将多种害虫的细胞、作用靶标或核酸片断同时制作在同一生物芯片上，以供药物的筛选。芯片技术具有高通量、大规模、平行性等特点，可以进行新药的筛选，也可采用生物芯片技术来寻找潜在药物靶标。用芯片做大规模的筛选研究可以省略大量的动物试验，缩短药物筛选所用时间。

高中生物实验如何去做及几个重要步骤

高中化学实验的方法有哪些?做实验的注意事项

我们从到了七年级就开始学习化学,但是学过的孩子们应该都知道,在初中只是先接触一下,到了高中化学才开始真正的学习,但是学习化学就会做实验,做实验的方式都有什么?

化学实验

只要是学习这个科目你就避免不了会出现做化学实验的情况,高中化学实验有什么方法.

1、掌控变量的方法

在实验或实际问题中,往往有许多因素发生变化,导致规律不易显现.前提就你要控制好量程的变化,然后依次研究一个因素的影响和利用.

例如,气体的性质、压力、整体面积和气温常常一同变化.我们可以控制一个状态参数不变,找到其他两个参数之间的关系,然后统一它们.还有我们之前人们的一些定理都是能进行钻研的.

2、等效替代法

还有的一些物理量还不是很好,没有表现的测试.它们可以被直观、但是这些还是可以很好的测出我们的成效还有这种量的出现,从而简化了问题.

还有你要是采用这种标准的直径,都是可以利用这种多层次的方式;丈量单摆的周期时,还有就是你可以看见这些状况都是能进行表现还能看见纸带,可隔几个点找出计数点剖析等.

3、累积法

还有要经过这种试剂都是能进行变化来精确到你的一些视线,可以将少量的物理量转化为大量的物理量.它不仅测量方便,而且可以提高测量精度,减少误差.

例如,在测量均匀细丝直径时,可以采用多圈闭合法,但是在你进行测量的情况之下,可以测量30-50次全振幅的时间;在分析点定时产生的胶带时,可以按几个间隔找到计数点.

4、留迹法

有些物理过程是短暂的,我们需要记录和研究它们,拍摄它们,像照相机一样分析它们.

例如,你要是使用这种实验的方式就可以看见这些波动的趋势,用点定时器记录物体的位置,用一些物种来进行抛球的位置,用示波器观察交流信号的波形.

5、外推法

但是还有的一些物理都是能进行改变都是可以不断的观察.但是在这种状况在之下,直接观察是不容易的.如果将局部观测规律外推到极端,就可以达到目的.

化学实验仪器

在上面的文章当中我给你们说了很多关于高中化学实验有哪些方法的类别,我相信大家应该也都知道了,每个实验都有它适合的方法,你们一定要择选适宜他的方式,还要注意一些事项.

如何做微生物的大肠菌群测定与细菌总数测定，具体过程最好详细一点。

用稀释涂布平板法 1．样品稀释液的制备 准确称取待测样品l0g，放入装有90ml无菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置摇床上振荡20min，使微生物细胞分散，静置20-30s，即成10-1稀释液；再用1ml无菌吸管，吸取10-1稀释液lml，移入装有9ml无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1ml，移入装有9ml无菌水的试管中，也吹吸三次，即成l0-3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀释菌液。 用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样品确定。样品中所含待