荧光定量pcr中标准误的计算

我想问一下荧光定量PCR法用2-△△Ct计算相对定量时结果的标准差是如何计算的

这个很简单啊。你做了一次实验，得到的样本做了一次PCR，得到了一次的相对定量（设对照组为1）。然后重新做实验，再做PCR，又得到一组，这样至少重复3次，就有3组相对定量了。计算标准差 对照组的标准差：取对照组的平均CT值设为1， 3次试验的CT值根据2-△△Ct计算相对量，可以算出对照组的标准差。

做荧光定量PCR时，它的计算公式是什么?

Ct=-1/lg(1+Ex)*lgX0+lgN/lg(1+Ex)。

n为扩增反应的循环次数，X0为初始模板量，Ex为扩增效率，N为荧光扩增信号达到阈值强度时扩增产物的量。

起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代Ct值。因此，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。

扩展资料

传统定量PCR方法简介：

1）内参照法：在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。

在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。

2）竞争法：选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。

扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。

参考资料来源：百度百科-荧光定量PCR

qPCR数据中对照组在表格中标准差怎么计算

3. Real-time qPCR定量方法 可以分为绝对定量和相对定量。绝对定量是用一系列已知浓度的标准品制作标准曲线，在相同的条件下目的基因测得的荧光信号量同标准曲线进行比较，从而得到目的基因的量。该标准品可以是纯化的质粒DNA，体外转录的RNA，或者是体外合成的ssDNA。相对定量可以分为比较Ct法和其他一些相对方法。比较Ct指的是通过与内参基因Ct值之间的相差来计算基因表达差异,也称之是2-DDCt 。 3.1绝对定量 从标准曲线获得线性方程： Y=-3.432X+34.638;R2= 0.995, E=95%，所以可以进行数据分析。 如果未知样品的 Ct=25， 代入方程： 25=-3

请问：做荧光定量PCR时，△△Ct值是什么意思，它的计算公式是什么？

△△Ct是荧光定量计算公式的简化形式，用于比较不同样品之间的差别或变化比率。

Ct=-1/lg(1+Ex)*lgX₀+lgN/lg(1+Ex)，其中，n为扩增反应的循环次数，X₀为初始模板量，Ex为扩增效率，N为荧光扩增信号达到阈值强度时扩增产物的量。△Ct(n)=Ct（目的基因）-Ct（内参基因）；△△CT(n)=△Ct(n)-△Ct(1)。

起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代Ct值。因此，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。

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荧光定量PCR的原理：

荧光定量PCR技术：在PCR反应体系中加入荧光基团，通过荧光信号不断累积而实现实时监测PCR全程，然后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在实时荧光定量PCR中，对全程PCR扩增过程进行实时检测，根据反应时间和荧光信号的变化可以绘制成一条曲线。

实时荧光定量常用的荧光化学分类有SYBR Green I法和Tag Man探针法。

Ct值：C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含义是每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。

参考资料来源：百度百科-荧光定量PCR

参考资料来源：百度百科-实时荧光定量PCR

我想问一下荧光定量PCR法用2-△△Ct计算相对定量的问题

做了一个实验，内部参考电压可以得到几个CT值，会得到多个目标基因。在这种情况下，根据CT值的平均值，将得到的比率（相对量）。 实验肯定不是唯一的一次，至少重复3次。这将是一个倍数的3个或更多，得到。 3个以上的值，你可以计算平均值和标准偏差的。