因为本人刚刚接触二代测序，在实验过程中，退火过程忘了调温度，直接下一步了，会对结果造成什么影响？

求RT-PCR 流程和注意事项

博凌科为-为你解答：RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。要求： 1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。 2. RT按要求做，一般不会出太大问题。3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变Mg2+浓度、退火温度能解决的。 1）RT和PCR时的引物设计是不是一定要先知道目的基因的序列？必须在RT时，引物设计有3种方法即a：Random 9mers；b：Oligo dT-Adaptor Primer；和c：特异的下游引物。如果用a和b方法，是扩增的所有的cDNA（理论上），还要用此产

pcr试验是什么意思？

PCR目录 〔PCR原理〕 PCR反应体系与反应条件 〔PCR步骤〕 〔PCR检测〕 〔PCR反应特点〕 [PCR仪器] 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)，简称PCR，是一种分子生物学技术，用于放大特定的DNA片段。可看作生物体外的特殊DNA复制。 DNA聚合酶（DNA polymerase I）最早于1955年发现 ，而较具有实验价值及实用性的Klenow fragment of E. Coli 则是于70年代的初期由Dr. H. Klenow 所发现，但由于此酶不耐高温，高温能使之变性, 因此不符合使用高温变性的聚合酶链式反应。现今所使用的酶(简称 Ta

如何测定一段已知序列DNA的旁侧序列

这样吧:克隆就可以了 一种简单有效的克隆未知旁侧DNA片段的方法 中华基因网 宋保亮 戚炜 李伯良 宋保亮（中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室,上海,200031） 戚炜（中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室,上海,200031;南京大学生物科学与技术系,南京,210093） 李伯良（中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室,上海,200031） 摘 要：操作含长插入片段的DNA克隆时, 经常需要进行亚克隆和测序实验. 通常的方法首先是得到插入片段的限制性内切酶谱, 然后

DNA亲子鉴定的具体流程？

隐私鉴定不需要被鉴定者提供身份证件，不方便到场的情况下还可采取邮寄样品的方式。隐私鉴定只需要鉴定样本即可，不需要提供证件和照片。个人亲子鉴定的目的在于消除猜忌和疑虑，维护家庭的和睦稳定。 司法亲子鉴定的流程 01 当事人必须提供有效证件的正本，由鉴定单位的工作人员核对和验证身份无误后，复印存档，正本当即归还当事人。 02 当事人亲笔填写“亲子鉴定申请书”，包括当事人的基本情况、申请原因等。孩子年幼无书写能力的，可由父母代为填写，再由小孩按手印确认。 03 亲子鉴定单位给当事人拍照存档，合影照片将用于亲子鉴定报告。 04 采集每位当事人的血样，每人采血2-3毫升;采血完毕，要求被采血当事人签名，

生物进化过程中，基因起到了什么样的作用？

有时，在生命的历史中，一种新的性状会进化，从而导致一组生物体内的多样性激增。以翅膀为例，它们的每一类动物都进化出许多不同的物种，如鸟、蝙蝠、昆虫和翼龙。科学家称这些为“关键创新”。

了解“关键创新”的发展对于理解地球上有机体的进化至关重要。其中大多数发生在遥远的过去，使它们很难从遗传学角度进行研究。幸运的是，在过去的几百万年中，有一组植物获得了这种特性。

带有花蜜刺的耧斗菜，为科学家们提供了一个机会，来研究支持一项关键创新的遗传变化。经过大量研究，加州大学圣塔芭芭拉分校的教授斯科特·霍奇斯（ScottHodges），研究助理伊万杰琳·巴列里尼（EvangelineBallerini）和他们在哈佛大学的合著者，已经确定了对这些结构的发育至关重要的基因。并且据他们所知，这是已经鉴定出关键发育基因的首批“关键创新”之一。他们的发现发表在PNAS杂志上。

研究人员以圣安东尼奥马刺篮球队主教练格雷格·波波维奇（GreggPopovich）命名该基因。“该基因是一个转录因子，这意味着它可以通过调节其他基因的活性来控制耧斗菜的花刺发育。”巴列里尼解释说，“所以我之所以选择波波维奇这个名字，是因为作为教练，波波维奇在某种意义上通过调节球员的活动，来控制圣安东尼奥马刺队的发展。”

耧斗菜祖先的花刺进化似乎导致了该属的迅速扩展。在过去的5到7百万年中，大约有70个物种进化，而其无毛的姊妹属只有4种。

耧斗菜不是唯一带有花刺的花。该性状在包括金莲花、百灵鸟和凤仙花在内的许多不同植物中独立地进化。霍奇斯说：“在每个族群中，有花刺的花比没有花刺的近亲拥有更多的物种。”

巴列里尼说：“我们认为多样性与花刺的进化有关，因为花刺产生的花蜜吸引着动物的授粉媒介。”改变花刺的长度或形状会改变能给花授粉的动物。“蜜蜂只是在蜂花之间移动花粉，蜂鸟只是在蜂鸟花朵之间移动花粉，因此您不会在这两个不同种群之间交换基因。”最终，两者可以分裂成不同的物种。

研究人员试图回答的问题是，这类创新首先是如何发展的。霍奇斯说：“如果我们能找到对关键创新发展至关重要的基因，那将有助于我们理解这种过程。”

“在大多数情况下，例如在鸟类、蝙蝠和昆虫的翅膀例子中，它们进化得很早，以至于很难找到对进化该特性至关重要的特定基因。”他补充说，“在这里，我们只有5到7百万年前才有一项关键创新的起源，这是一个相当简单的特征，所以它要简单一些。”

寻找波波维奇（POPOVICH）

由于耧斗菜是最近进化的，因此它们中的大多数可以彼此形成可育的杂种。在1950年代和60年代，波兰的遗传学家将其表兄弟姐妹与一个无毛的物种（适当地称为无毛的哥伦拜因）杂交。她发现在第一代后代中都有花刺，但是自花授粉产生了第二代，在四分之一的植物中再次出现了无刺毛。

大约半个世纪后，这一比例对霍奇斯和巴列里尼的工作至关重要。这个简单的分数表明单个基因控制着花刺的发展。但是耧斗菜大约有30,000个基因，只有一个是他们想要的基因。

跟随他的前任的脚步，霍奇斯还用一种被刺激的物种越过了无刺的耧斗菜，然后对其后代进行了自花授粉。但是与以前的实验不同的是，巴列里尼和霍奇斯现在有了搜索植物遗传密码的工具。

巴列里尼对近300株第二代植物中的每一种进行了基因组测序，并寻找无毛植物从其无毛祖父母那里继承了两个拷贝的实例。这将搜索范围缩小到了一种植物染色体上的约1,100个基因。

仍然有1,100个基因需要分类。“无法保证这些方法会导致我们找到我们想要的基因。”巴列里尼说，“在所有的实验和分析中肯定有很多工作要做，但最后还是有些运气。”

巴列里尼检查了无刺耧斗菜和其他三个受刺激物种中花瓣早期发育五个阶段的基因表达。她对每个阶段打开的所有基因进行了测序，寻找无毛植物和带毛植物之间的一致差异。最终，在哈佛大学一位合作者的帮助下，巴列里尼怀疑她已经确定了正确的基因。它总是在无毛种中关闭，在有毛种中打开，并且是先前在遗传杂交中鉴定为与无毛花相关的1100个基因之一。现在该发现验证了她的假设。

她使用转基因病毒敲低了该基因以及产生红色色素的关键基因的表达。这样一来，他们只要看一下颜色就能分辨出哪些花瓣受到了影响。

在波波维奇（POPOVICH）边上的任何地方，花都会长出细小的花刺。但是，其长度取决于单元的数量和大小。因此，研究人员与合作者一起计算了组成这些细小花刺的每个细胞的数量并测量了它们的长度。

“较长的花刺具有更多的细胞，较短的马刺具有更少的细胞。”霍奇斯指出，“因此，该基因一定是通过影响产生多少细胞而起作用的。”

巴列里尼记得完成最后的分析后坐在办公室里。她开始向潜在的体育爱好者研究生扎克·卡宾（ZacCabin）抛出潜在的基因名称。她回忆说：“与此同时，扎克和我互相转身，都说'波波维奇（POPOVICH）！'。”这个名字似乎很合适。“而且，如果我们确定其他基因在花刺发展中发挥作用，那么我们就有可能以马刺队中的一些参与者的名字命名它们。”

通往新发现的道路

虽然确定波波维奇（POPOVICH）当然是一项成就，但这项发现的真正价值在于它揭示了“关键创新”的演变。在这项工作之前，没有一个植物群，具有有众所周知的花刺基因组。"我们不知道从哪里开始，"霍奇斯说。"这一发现为我们提供了立足之地。

他补充说：“一旦我们确定了一个基因，就像这个基因，这似乎是花刺形成过程中的关键，那么我们就可以开始找出所有的成分了。”该小组现在可以开始研究波波维奇（POPOVICH）调控哪些基因，以及哪些基因调控波波维奇（POPOVICH）。“这是全面了解整个系统立足点。”

尽管研究人员不知道波波维奇（POPOVICH）在其他植物群中如何发挥作用，但它似乎会影响在三叶草上生长的小叶数量。耧斗菜在其叶片中也表达该基因。巴列里尼建议，也许它是从叶子中吸收到花瓣发育的。

她解释说，新颖的改编并非无所不在。“当您在开发一个新结构时，通常不会在开发一个全新的基因。”通常，生物对现有基因进行重新启用或增加用途。

作者还有兴趣识别涉及刺激形成第二阶段的基因：刺激花刺中细胞的伸长率。

“现在，我们已经确定了这个基因，就要做这些事情。”霍奇斯说，“而且由于它是一个转录因子，它必须具有受到影响的特定基因。下一步的逻辑步骤是确定该基因的靶标，这将使我们更加了解其功能。”